Zprávy

Javascript je aktuálně ve vašem prohlížeči zakázán.Některé funkce tohoto webu nebudou fungovat, pokud je zakázán JavaScript.
Zaregistrujte se se svými konkrétními údaji a konkrétním lékem, který vás zajímá, a my vám poskytnuté informace spojíme s články v naší rozsáhlé databázi a okamžitě vám zašleme kopii PDF e-mailem.
Ding Jingnuo, Zhao Weifeng, Oddělení infekčních nemocí, první přidružená nemocnice univerzity Suzhou, město Suzhou, provincie Jiangsu, 215000 Tel.nádory trávicího systému s 5letým celkovým přežitím 14,1 %.Mnoho pacientů s HCC je diagnostikováno v pokročilém stadiu, takže včasný screening je nezbytný pro snížení mortality na HCC.Kromě běžně používaných detekčních indikátorů, jako je sérový alfa-fetoprotein (AFP), čočkový lektin-reaktivní alfa-fetoprotein (AFP-L3) a abnormální protrombin (protein II indukovaný nedostatkem vitaminu K, PIVKA-II), techniky tekutinové biopsie Ukázalo se, že má diagnostickou hodnotu při detekci HCC.Ve srovnání s invazivními postupy může tekutinová biopsie detekovat cirkulující maligní metabolity.Techniky fluidní biopsie detekují cirkulující nádorové buňky, cirkulující nádorovou DNA, cirkulující RNA a exozomy a používají se pro časný screening, diagnostiku a prognostické hodnocení HCC.Tento článek shrnuje molekulární biologii a aplikaci různých technik tekutinové biopsie k izolaci slibných biomarkerů, které mohou být životaschopnými možnostmi pro časné hodnocení HCC ke zlepšení časného screeningu vysoce rizikových skupin HCC.Klíčová slova: technika tekutinové biopsie, hepatocelulární karcinom, vysoce riziková skupina .
Hepatocelulární karcinom (HCC) je častým zhoubným nádorem trávicího traktu, který se řadí na šesté místo mezi novými případy zhoubných nádorů u mužů i žen.1 Celosvětově je rakovina jater třetí nejčastější příčinou úmrtí na rakovinu po rakovině plic a tlustého střeva a konečníku a představuje 8,3 % úmrtí souvisejících s rakovinou ze všech maligních novotvarů.1 Prognóza HCC úzce souvisí se stádiem diagnózy.Hlavními důvody špatného přežití u HCC jsou intrahepatální metastázy, tromby portálního žilního tumoru a vzdálené metastázy vylučující resekci a mnohé z těchto charakteristik jsou u pacientů přítomny již v době diagnózy.
Na základě diagnostických a léčebných pokynů jsou hlavními rizikovými faktory pro rozvoj HCC cirhóza jater, chronická infekce virem hepatitidy B (HBV) nebo virem hepatitidy C (HCV), alkoholické ztučnění jater a nealkoholické ztučnění jater (NAFLD). ).2 Mezi rizikové faktory HCC dále patří příjem potravy kontaminované aflatoxiny, schistosomiáza, další příčiny cirhózy, rodinná anamnéza rakoviny jater, cukrovka, obezita, kouření a poškození jater způsobené léky.Vysoce rizikové skupiny ve věku 35 a 45 let by měly podstupovat pravidelné lékařské prohlídky.Včasný screening je důležitou strategií včasné léčby ke zlepšení celkového přežití pacientů s HCC.
Biomarkery jako AFP, AFP-L3 a PIVKA-II se doporučují pro časný screening HCC3,4.Techniky tekuté biopsie ukázaly slibné výsledky v časné diagnostice a hodnocení léčby.5,6 Významného pokroku bylo dosaženo v tekuté biopsii HCC, která může mít vyšší senzitivitu a specificitu než běžně používané sérové ​​markery, jako je AFP (tabulka 1).
AFP je široce používaný biomarker u HCC a v současné době je nejpodrobnějším biomarkerem široce používaným pro časný screening, diagnostiku a hodnocení onemocnění.Trvale zvýšená hladina AFP je považována za rizikový faktor progrese HCC.7,8 Míra detekce malého hepatocelulárního karcinomu (sHCC) se zvyšuje s rozvojem ultrazvuku a počítačové tomografie a bylo zjištěno, že AFP je zvláště necitlivá na detekci hHCC v klinické praxi.Podle retrospektivní multicentrické studie9 byla AFP pozitivní u 46 % (616/1338) případů HCC a 23,4 % (150/641) případů sHCC.Kromě toho jsou hladiny AFP zvýšené u pacientů s chronickým onemocněním jater a cirhózou.10 AFP má tedy omezený screeningový účinek na sHCC.11 Podle Asijsko-pacifického klinického doporučení pro hepatocelulární karcinom se použití AFP nedoporučuje.12 Klinické důkazy naznačují, že PIVKA-II je v léčbě HCC lepší než AFP a že kombinace PIVKA-II a AFP vyšší diagnostickou hodnotu u HCC.13 Ve srovnání s tkáňovou biopsií tekutinová biopsie primárně detekuje metabolity spojené s nádorem v tělesných tekutinách (krev, sliny, pleurální mok, cerebrospinální mok nebo moč) a je méně invazivní pro tkáně.14 Kromě toho mohou tekuté biopsie odrážet maligní rysy, které nejsou přítomny v primární nádorové tkáni.15 Tekuté biopsie zatím nejsou v klinické praxi testovány u všech typů nádorů, ale jejich diagnostický potenciál u rakoviny přitahuje pozornost onkologů.16 Tekutinová biopsie dokáže detekovat cirkulující nádorové buňky (CTC), cirkulující nádorovou DNA (cDNA), cirkulující volnou RNA (ecRNA) a exozomy.V tomto článku se budeme zabývat charakteristikami, rolí a aplikací různých technik tekutinové biopsie při časném screeningu vysoce rizikových skupin HCC.
Extracelulární DNA (cfDNA) ve vzorcích krve zdravých jedinců byla poprvé popsána v roce 1948 Mandelem et al.17 cfDNA je bezbuněčný fragment DNA o délce přibližně 160–180 bp, pocházející primárně z lymfocytů a myeloidních buněk.ctDNA je specifický mutantní fragment DNA uvolňovaný nádorovými buňkami do periferní krve, který představuje genomovou informaci nádorových buněk po určitých patofyziologických procesech, včetně nekrózy, apoptózy a vylučování.Podíl ctDNA v celkové cfDNA se značně liší podle typu nádoru a udává se, že fragmenty cDNA jsou typicky kratší než 167 bp.18 Underhillova studie ukázala, že fragmenty cfDNA jsou obecně kratší než normální cfDNA.19 Ve srovnání se zdravými jedinci je celková délka fragmentů cfDNA v krvi pacientů s rakovinou kratší, takže cfDNA lze použít jako indikátor časného screeningu nádoru.Obohacení určitých podskupin délek cfDNA fragmentů může zlepšit detekci cDNA asociované s nemetastatickými solidními nádory.Studie ukázaly, že ctDNA se nachází ve více než 75 % pokročilých rakovin slinivky, tlustého střeva, močového měchýře, gastrointestinálního traktu, jater, vaječníků, prsu, melanomu a hlavy a krku.20,21 Množství ctDNA v krvi však závisí na umístění nádoru.22 Ve studii společnosti Bettegoud bylo zjištěno, že pacienti s kolorektálním karcinomem, rakovinou prsu, jater, plic a prostaty mají vyšší hladiny cDNA v krvi než ostatní druhy rakoviny.Naproti tomu u pacientů s rakovinou dutiny ústní, rakovinou slinivky břišní, rakovinou žaludku a gliomem byla koncentrace cDNA v krvi nižší.dvacet jedna
Protože ctDNA obsahuje stejné genetické mutace jako primární nádorové buňky, lze cDNA použít k detekci heterogenních nádorově specifických mutací a epigenetických změn, včetně metylace, hydroxymetylace, variací jednotlivých nukleotidů a variací počtu kopií.dvacet tři
Metylace DNA je jednou z nejčastějších epigenetických změn, které mají za následek genovou represi.Ve srovnání s normálními buňkami existují rozdíly v celkové úrovni metylace genomu nádorových buněk, zejména v metylaci nádorových supresorových genů, které lze detekovat v rané fázi, což naznačuje, že změny v metylaci DNA mohou být indikátorem časného detekce tumorigeneze.Nádorové supresorové geny spojené s HCC mohou být inaktivovány methylací promotoru, čímž se stimuluje tumorigeneze.24 Metylace DNA je díky své tkáňové specifitě, detekovatelnosti a věkové nezávislosti ideálním markerem pro časnou diagnostiku nádorů.Kromě toho je methylace DNA častější ve srovnání se somatickými mutacemi, protože v každé oblasti cílového genomu je více cílových oblastí a několik pozměněných míst CpG.25 Kromě více CpG míst byl v DBX2, THY1, MT1M, INK4A, VIM, FBLN1 a RGS10.26 Xu et al identifikován velký počet nezávislých hypermethylovaných lokusů v ctDNA.Porovnáním vzorků cfDNA od 1098 pacientů s HCC a 835 zdravých kontrol bylo zjištěno, že geny spojené s HCC silně korelují s odpovídajícími signaturami metylace cDNA v plazmě.25 Na základě laboratorní analýzy byl vyvinut prediktivní model obsahující 10 metylačních markerů se senzitivitou a specificitou 85,7 %, resp. 94,3 %, přičemž tyto markery vysoce korelovaly s nádorovou hmotou, stadiem nádoru a odpovědí na léčbu.Tyto výsledky naznačují, že použití cDNA methylačních markerů je velmi slibné v diagnostice, monitorování a prognóze HCC.V methylačním modelu sestávajícím ze tří aberantně methylovaných genů (APC, COX2, RASSF1A) a jedné miRNA (miR203) prezentovaného Lu et al27 byla citlivost a specificita modelu 27 pro diagnostiku HBV asociovaného HCC srovnatelná.80 %.Kromě toho mohl model detekovat 75 % nediagnostikovaných pacientů s HCC s hladinou AFP 20 ng/ml.Gen pro protein rodiny 1A domény asociované s Ras (RASSF1A) je hlavní repetitivní sekvencí DNA v lidském genomu.Araujo a kol.dospěli k závěru, že hypermetylace promotoru RASSF1A by mohla být cenným biomarkerem pro časný screening HCC a potenciálním molekulárním cílem pro epigenetickou terapii.28 V jedné studii byla hypermetylace promotoru RASSF1A v séru nalezena u 73,3 % pacientů s HCC.29 Dlouhý vložený nukleotidový element 1 (LINE-1) je dalším vysoce aktivním mediátorem retrotranspozice.Hypometylace LINE-1 byla nalezena v DNA 66,7 % vzorků séra HCC a byla spojena s časnou recidivou a špatným přežitím po radikální resekci.29 Hypermetylace je běžný genetický proces, který hraje jedinečnou roli ve vývoji jaterní cirhózy a HCC.30 Naproti tomu hydroxymethylace je proces demetylace, který indukuje reaktivaci a expresi genu a detekci produktu 5-hydroxymethylcytosinu (5-hmC) v tomto procesu lze použít k identifikaci nádoru.Methylace a hydroxymethylace cDNA jsou spojeny s tumorigenezí a mohou přispět k časnému screeningu HCC.Ve studii 2554 subjektů bylo ve vzorcích cfDNA nalezeno 31 5-hmC v celém genomu a 32 genů bylo identifikováno porovnáním sekvencí 5-hmC u pacientů s HCC a vysoce rizikových skupin, jako jsou pacienti s chronickými onemocněními.Diagnostické modely jaterních onemocnění.a cirhóza.Tento model byl lepší než AFP v rozlišení HCC od nenádorové tkáně.
Mutace v kódujících oblastech mohou vést k transkripčním abnormalitám, které mohou vést ke změnám v proteinových sekvencích a nakonec k rakovině.Jednonukleotidové varianty jsou důležitými genomovými markery pro časný screening nádorů díky jejich vysoké tkáňové spolehlivosti a vysoké nádorové a tkáňové specifitě.Četné studie související s HCC využívající sekvenování nové generace (NGS) pro sekvenování exomu a celého genomu rakoviny identifikovaly běžné mutované buněčné geny, jako jsou TP53 a CTNNB1, a také několik včetně ARID1A, MLL, IRF2.Nové geny, ATM, CDKN2A, FGF19, PIK3CA, RPS6KA3 a JAK1 vykazují střední míru mutací. Analýza funkce mutantního genu naznačuje, že změny v remodelaci chromatinu, přenos signálu Wnt/β-catenin a JAK/STAT, dráha buněčného cyklu P53, epigenetické modifikátory, dráhy oxidačního stresu, dráha PI3K/AKT/MTOR a RAS/RAF/ Dráha kinázy MAPK hraje zásadní roli v onkogenezi HCC.32,33 Ve studii, ve které byly detekovány mutace spojené s nádorem, Huang et al zjistili, že frekvence mutací souvisejících s nádorem závislých na ctDNA byla 19,5 % a specificita byla 90 %. .34 Navíc pacienti, kteří prodělali vaskulární invazi, měli vyšší pravděpodobnost mutací ctDNA (P=0,041) a kratší dobu přežití bez recidivy (P<0,001). Analýza funkce mutantního genu naznačuje, že změny v remodelaci chromatinu, přenos signálu Wnt/β-catenin a JAK/STAT, dráha buněčného cyklu P53, epigenetické modifikátory, dráhy oxidačního stresu, dráha PI3K/AKT/MTOR a RAS/RAF/ Dráha kinázy MAPK hraje zásadní roli v onkogenezi HCC.32,33 Ve studii, ve které byly detekovány mutace spojené s nádorem, Huang et al zjistili, že frekvence mutací souvisejících s nádorem závislých na ctDNA byla 19,5 % a specificita byla 90 %. .34 Navíc pacienti, kteří prodělali vaskulární invazi, měli vyšší pravděpodobnost mutací ctDNA (P=0,041) a kratší dobu přežití bez recidivy (P<0,001).Analýza funkce mutantního genu naznačuje, že změny v remodelaci chromatinu, signalizaci Wnt/β-kateninu a JAK/STAT, dráze buněčného cyklu P53, epigenetických modifikátorech, drahách oxidačního stresu, dráze PI3K/AKT/MTOR a dráze kinázy RAS/RAF/MAPK kritickou roli v tumorigenezi HCC.32,33 Ve studii, která nalezla mutace spojené s tumorem, Huang et al.zjistili, že frekvence mutací souvisejících s nádorem závislých na ctDNA byla 19,5 % a specificita byla 90 %..34 кроме того, у п пациентов с сосудистой инвазией чаще вс к к б б б б б т) .34 Kromě toho měli pacienti s vaskulární invazí více mutací cDNA (P=0,041) a kratší dobu přežití bez onemocnění (P<0,001).Funkční analýza mutantních genů odhalila remodelaci chromatinu, signalizaci Wnt/β-catenin a JAK/STAT, dráhu buněčného cyklu P53, epigenetické modifikátory, dráhu oxidačního stresu, dráhu PI3K/AKT/MTOR a RAS/RAF/MAPK kinázová dráha hraje kritickou roli v onkogenezi HCC. 32,33 在 一 项 检测 到 肿瘤 相关 突变 的 研究 中 ， HUANG 等 人 肿瘤 相关 突变 依赖于 CTDNA 的 频率 为 ， ， 特异性 特异性 特异性 特异性 特异性 特异性 特异性 特异性 特异性 特异性 特异性 特异性 特异性 特异性 特异性 特异性 特异性 特异性 特异性 特异性 特异性 特异性 特异性 特异性 特异性 特异性 特异性 特异性 特异性 可能 可能 可能 可能 可能 可能 可能 可能 可能 可能 可能 可能 可能 可能 可能 可能 可能 可能 可能 可能 可能 可能 可能 可能 可能 可能 可能 可能 可能 可能 可能 可能 可能突变（P=0,041）和更短的无复发生存期（P<0,001）。 32,33 在 一 项 检测 到 相关 突变 的 研究 ， HUANG 等 发现 相关 突变 依赖于 CTDNA 的 为 19,5% ， 特异性 为 90% .34 此外 经历 血管 侵犯 的 可能 发生 发生 发生 发生 发生 更 更 更 发生短的无复发生存期（P<0,001）。32,33 Ve studii, která nalezla mutace spojené s nádorem, Huang et al.zjistili, že mutace spojené s nádorem byly z 19,5 % závislé na cDNA se specificitou 90 % 34. Navíc u pacientů, kteří prodělali vaskulární invazi, byla větší pravděpodobnost, že se u nich vyvine cDNA.мутация (P = 0,041) a более короткая безрецидивная выживаемость (P <0,001). mutace (P=0,041) a kratší doba přežití bez onemocnění (P<0,001).Dalším běžným řídícím genem HCC je TP53, který má míru mutace přes 30 %.Studie ukázaly, že frekvence mutací TP53 v ctDNA v krvi a moči se pohybuje od 5 % do 60 %.35 Johanova studie ukázala, že spektrum mutací ctDNA u pozdního HCC má podobnou míru mutací jako u časného HCC, včetně promotoru TERT (51 %), TP53 (32 %), CTNNB1 (17 %), PTEN (8 %), mutací v AXIN1., ARID2, KMT2D a TSC2 (po 6 %).36 Onkogen β-kateninu (CTNNB1) hraje důležitou roli v signální dráze Wnt.Koaktivátor transkripce CTNNB1 může podporovat genovou expresi, která může vést k buněčné proliferaci, inhibici apoptózy a angiogenezi.CTNNB1 může také interagovat s TERT za účelem indukce transformace hepatocytů.33 U některých solidních nádorů je promotor TERT často mutován.Změny v TERT, jedné z prvních genetických změn v maligní transformaci HCC, mohou vést k reaktivaci telomerázy v cirhotických hepatocytech a mohou podporovat proliferaci a bránit stárnutí.Mutace v promotoru 33-37 TERT se objevují u 59-90 % pacientů s proliferativními jaterními uzly a časným HCC a jsou spojeny s přežitím.38
Změny počtu kopií (CNA) jsou důležitým podtypem somatických mutací.Výzkum ukázal, že rozšířená a ohnisková zátěž CNA je genomickým podpisem schopným předpovídat infiltraci a vyloučení imunitního systému u některých typů rakoviny.39 Aktivní infiltrační signalizace, vysoká cytolytická aktivita, těžký zánět a genetické markery spojené s prezentací antigenu u HCC.Analýza datového pole jednonukleotidových polymorfismů u 477 subjektů odhalila nízkou zátěž CNS.Naproti tomu chromozomálně nestabilní nádory s vysokou extenzivní zátěží CNA vykazovaly známky imunitní rejekce a byly spojeny s proliferací, opravou DNA a dysfunkcí TP53.Xu a kol.ukázali, že skupina HCC měla vyšší skóre CNA než skupina s chronickým onemocněním jater.40 Pomocí celogenomového sekvenování jedné buňky bylo zjištěno, že CNA se objevují časně v hepatokarcinogenezi a zůstávají relativně stabilní během progrese nádoru.41 Chung a kol.zjistili, že hladiny cfDNA byly významně zvýšené u pacientů s HCC a že CNA v celém genomu v cfDNA byly důležitým nezávislým prognostickým markerem u pacientů s HCC léčených sorafenibem.42 U pacientů s vyšší zátěží CNA byla pravděpodobnější progrese onemocnění a úmrtí než u pacientů s nižší zátěží CNA.Ollerich a kol.zjistili, že index nestability počtu kopií (CNI) lze použít k hodnocení CNA v cfDNA pacientů s rakovinou.Poznamenali, že pacienti s pokročilým karcinomem měli významně vyšší skóre CNI než kontrolní skupina, která hodnotí odpověď pacientů na systémovou chemoterapii a imunoterapii.43 Tyto výsledky naznačují, že CNA nalezené v tekutých bioptických vzorcích mohou sloužit jako prognostické indikátory u pacientů s pokročilým karcinomem.HCC na pozadí systémové terapie.
V současné době lze metody používané k detekci ctDNA rozdělit na metody cílené a necílené.Stručně řečeno, cílené metody, jako je digitální polymerázová řetězová reakce (dPCR), BEAMing digitální PCR, Amplification Refractory Mutation System-PCR, Capp-Seq a Tam-Seq, jsou vysoce citlivé na předem definované geny.Metody mimo cíl, jako je sekvenování celého genomu a NGS, poskytují komplexní pohled na celou genomickou krajinu.44 Ve srovnání s cílovými panely může sekvenování celého genomu detekovat nejen bodové mutace a inzerce, ale také přeuspořádání a variace počtu kopií.prognóza a CTC a cfDNA jsou dobré indikátory, které lze použít pro dynamické monitorování HCC.45 Kromě toho může být při detekci HCC užitečnější analýza cfDNA.Yan a kol.ukázali, že cfDNA v plazmě pacientů s HCC byla významně vyšší než u pacientů s jaterní fibrózou a zdravých kontrol.Ve srovnání s AFP se očekává, že ctDNA bude lepším screeningovým markerem pro časnou HCC.46 V prospektivní studii 47 tekutých biopsií, které testovaly cfDNA a protein v populační populaci, se ukázalo, že jsou účinné při odlišení pacientů s HCC od pacientů bez HCC.Při sledování 331 ultrazvukově normálních a AFP-negativních pacientů byla senzitivita a specificita cfDNA pro diagnostiku HCC 100 %, respektive 94 %, takže cDNA mohla detekovat HCC u asymptomatických HBsAg séropozitivních jedinců.Ve studii Yeo48 byla u pacientů s HCC zjištěna vysoká frekvence (92,5 %) hypermetylace promotoru RASSF1A.Kromě toho Xu a kol.vytvořili diagnostický model pro predikci HCC pomocí panelu specifických metylačních markerů se specificitou 90,5 % a senzitivitou 83,3 %.Panel umožňuje odlišit pacienty s HCC od pacientů s jinými onemocněními jater, což je lepší než AFP.Zjistili také, že normální kontroly, které byly testovány pozitivně, mohou mít rizikové faktory pro HCC, jako je infekce HBV nebo anamnéza užívání alkoholu.25 Předpokládáme, že vysoce rizikové faktory pro HCC mohou podporovat hypermetylaci cfDNA, která pak přispívá k progresi HCC, a cfDNA tak může hrát klíčovou roli ve screeningu vysoce rizikových skupin.Cai a kol.shrnují celou škálu mutací ctDNA a nabízejí robustní strategii pro hodnocení nádorové zátěže u pacientů.49 Tato strategie dokáže identifikovat tumorigenezi v mediánu 4,6 měsíce před změnou zobrazení a prokázala lepší diagnostický výkon ve srovnání se sérovými biomarkery AFP, AFP-L3 a PIVKA-II.Diagnostická hodnota testování cDNA byla prokázána, když není k dispozici hodnocení obrazu, takže testování cDNA má hodnotu v diagnostice časného HCC u vysoce rizikových skupin.Nedávno vědci použili technologii NGS k analýze indikátorů mnohorozměrné genetické variace (včetně 5-hydroxymethylcytosinu, 5′-motivu, fragmentace, stopy nukleozomů, HIFI) ve 3204 klinických vzorcích a cfDNA.50 Revalidované modely HIFI se třemi nezávislými sadami testů, testů a testů ukázaly stabilní a spolehlivou diskriminaci mezi populacemi HCC a non-HCC s citlivostí 95,79 % a 95,42 % v testech specifických pro HCC a testovacích sadách.Pohlaví bylo 95,00 % a 97,83 %.Diagnostická hodnota HIFI metody je vyšší než AFP v rozlišení HCC od cirhózy.Kromě toho se ctDNA využívá i v chirurgické léčbě.Atsushi a kol.stanovili předoperační sérové ​​hladiny ctDNA u pacientů s HCC a zjistili, že míra recidivy a míra extrahepatálních metastáz v cDNA pozitivní skupině byly významně vyšší než v cDNA negativní skupině a hladiny cDNA významně korelovaly.s progresí nádoru.51 Jako vysoce citlivý biomarker může ctDNA předpovídat schopnost HCC napadnout cévy.Wang a kol.provedli sekvenování celého genomu 46 pacientů s HCC a multivariační analýza ukázala, že prahová hodnota frekvence alely varianty cDNA pro invazi do mikrocév je 0,83 %, senzitivita 89,7 % a specificita 80,0 %.nezávislý rizikový faktor pro mikrovaskulární invazi u resekabilního HCC, což naznačuje, že cDNA může pomoci vést optimální léčbu.Závěrem lze říci, že ctDNA se plně podílí na výskytu a rozvoji HCC a může být použita pro časný screening, chirurgické hodnocení a monitorování onemocnění.
CTC jsou maligní buňky odvozené z primárních nádorů nebo metastáz, které metastázují do krevního řečiště.Nádorové buňky vylučují matricové metaloproteinázy (MMP), které narušují bazální membránu a umožňují nádorovým buňkám přímý vstup do krevních a lymfatických cév.Většina CTC je však rychle eliminována anoikis, imunitním útokem nebo smykovým stresem.53 Epiteliálně-mezenchymální přechod (EMT) umožňuje snadnou izolaci CTC z primární nádorové tkáně, invazi do kapilár a získání významně lepšího přežití, metastáz, invazivnosti a lékové rezistence.Studie ukázaly, že mezi různými nádorovými buňkami v primárních metastatických nádorech existuje hluboká heterogenita.Analýza CTC tedy může vést ke komplexnímu pochopení heterogenity nádorových buněk.54
Specifické markery pro CTC asociované s HCC zahrnují glypikan-3 (GPC3), asialoglykoproteinový receptor (ASGPR), adhezní molekulu epiteliálních buněk (EpCAM) a markery asociované s kmenovými buňkami, jako je CD44, CD90, 55 a intercelulární adhezní molekula 1 (ICAM1).) .56 Marker GPC3 je protein ukotvený v buněčné membráně, který se klinicky používá pro patologickou analýzu a charakterizaci HCC.57 Exprese GPC3 je častější u nádorových buněk HCC se střední a nízkou diferenciací a podporuje extrahepatální migraci;navíc přítomnost GPC3+ CTC indikuje metastatický HCC.58 ASGPR je transmembránový protein exprimovaný pouze na povrchu hepatocytů a je vysoce exprimován v dobře diferencovaných HCC.EpCAM je jedním z nejčastěji používaných proteinů asociovaných s membránou pro zachycení CTC.EpCAM byl identifikován jako povrchový marker buněk HCC s charakteristikami kmenových buněk,59 což koreluje s různými klinickopatologickými rysy HCC, jako je vaskulární invaze, hodnocené hladiny AFP a pokročilé stádium rakoviny jater v Barcelonské nemocnici (BCLC).Fenotyp 60 CTC EMT je vysoce metastatický.54 EMT procesy v CTC podporují metastázy HCC.Exprese markerů EMT, jako je vimentin, twist, E-box zinc finger binding (ZEB) 1, ZEB2, hlemýžď, slimák a E-cadherin, byla studována v CTC odvozených z jater od pacientů s HCC.58 Systém CanPatrol™ vyvinutý Chengem [61] klasifikoval CTC do tří fenotypových podskupin na základě převážně exprimovaných markerů: epiteliální fenotyp (EpCAM, CK8/18/19), mezenchymální fenotyp (vimentin, coiled) a smíšené fenotypy.U 176 pacientů byla celková CTC lepší než AFP v odlišení HCC od benigního onemocnění jater.Hodnoty AUC pro celkový CTC, AFP a kombinovaný celkový CTC a AFP byly 0,774 (95% CI, 0,704–0,834), 0,669 (95% CI, 0,587–0,750) a 0,821 (95% CI, 0,856–0,856–0,834 ).), resp.CTC klasifikace založená na EMT může predikovat diagnózu HCC, časnou recidivu, metastázy a kratší celkový čas.
V současné době metody detekce CSC zahrnují fyzikální metody a biologické metody.Fyzikální metody, často označované jako obohacení založené na biofyzikálních vlastnostech, závisí především na fyzikálních vlastnostech CSC, jako je velikost, hustota, náboj, pohyblivost a deformovatelnost.V závislosti na fyzikálních vlastnostech existují různé metody, jako jsou systémy založené na filtraci, dielektroforéza atd. Poslední jmenovaná, známá také jako obohacení na základě imunoafinity, je založena hlavně na vazbě antigen-protilátka, protože metoda využívá protilátky proti biomarkerům specifickým pro nádory. jako je EpCAM, ASGPR, lidský receptor epidermálního růstového faktoru 2 (HER2), prostatický specifický antigen (PSA), lidský pancytokeratin (P-CK) a karbamoylfosfát syntáza 1 (CPS1).62 Jiný typ, nazývaný metoda bez obohacování, využívá průtokovou cytometrii k odlišení CTC od leukocytů na základě vyššího poměru a velikosti jádra k cytoplazmě.V současnosti je jediným testem pro detekci CTC schváleným FDA systém Cell-Search™, který využívá marker buněčného povrchu EpCAM. Kombinovaná detekce CTC založená na markerech by však mohla zvýšit míru pozitivity.54 Směs protilátek proti ASGPR a CPS1 dosáhla u pacientů s HCC detekce CTC 91 %.63 Zhang et al použili CTC-Chip s protilátkami proti ASGPR, P -CK a CPS1 a odlišila pacienty s HCC od pacientů s benigním onemocněním jater nebo non-HCC rakovinou v míře 100 %.64 Studie Wanga detekovala EpCAM+ CTC u 60 % ze 42 pacientů s HCC a zjistila významné korelace mezi oběma pozitivitami četnost a počet CTC se stadiem TNM.65 Guo et al zjistili, že skóre PCR odvozené od CTC bylo zvýšené u 125/171 (73 %) pacientů, jejichž hladina AFP byla <20 ng/ml s citlivostí 72,5 % a specificita 95,0 % ve srovnání s 57,0 % a 90,0 % pro AFP při limitu 20 ng/ml.66 Kombinace AFP a CTC může zlepšit detekci HCC.45 Předpokládá se, že CTC mají výhodu oproti AFP při časném screeningu skupin s vysokým rizikem HCC. Kombinovaná detekce CTC založená na markerech by však mohla zvýšit míru pozitivity.54 Směs protilátek proti ASGPR a CPS1 dosáhla u pacientů s HCC detekce CTC 91 %.63 Zhang et al použili CTC-Chip s protilátkami proti ASGPR, P -CK a CPS1 a odlišila pacienty s HCC od pacientů s benigním onemocněním jater nebo non-HCC rakovinou v míře 100 %.64 Studie Wanga detekovala EpCAM+ CTC u 60 % ze 42 pacientů s HCC a zjistila významné korelace mezi oběma pozitivitami četnost a počet CTC se stadiem TNM.65 Guo et al zjistili, že skóre PCR odvozené od CTC bylo zvýšené u 125/171 (73 %) pacientů, jejichž hladina AFP byla <20 ng/ml s citlivostí 72,5 % a specificita 95,0 % ve srovnání s 57,0 % a 90,0 % pro AFP při limitu 20 ng/ml.66 Kombinace AFP a CTC může zlepšit detekci HCC.45 Předpokládá se, že CTC mají výhodu oproti AFP při časném screeningu skupin s vysokým rizikem HCC.Kombinovaná detekce CTC na základě markerů však může zvýšit procento pozitivních výsledků.54 Směs protilátek anti-ASGPR a CPS1 dosáhla u pacientů s HCC detekce CTC 91 %.63 Zhang et al.použili CTC čip s protilátkami proti ASGPR, P-CK a CPS1 a také odlišili pacienty s HCC od pacientů s benigním jaterním onemocněním nebo non-HCC v míře 100 %.частота и количество ЦОК со стадией TNM.65 Guo и соавторы обнаружили, что показатель ПЦР, полученный из ЦОК, был повышен у 125/171 (73%) пациентов, у которых уровень АФП был <20 нг/мл с чувствительностью 72,5% и специфичность 95,0% по сравнению с 57,0% и 90,0% для АФП при пороговом уровне 20 нг/мл.66 Комбинация АФП и ЦОК может улучшить обнаружение ГЦК.45 Считается, что ЦОК имеют преимущество перед АФП при раннем скрининге групп. četnost a počet CTC ve stádiu TNM.65 Guo et al zjistili, že PCR odvozená z CTC byla zvýšena u 125/171 (73 %) pacientů, kteří měli hladiny AFP < 20 ng/ml se senzitivitou 72,5 % a specificitou 95,0 % ve srovnání s 57,0 % a 90,0 % pro AFP při hraniční hladině 20 ng/ml.66 Kombinace AFP a CTC může zlepšit detekci HCC.45 CTC jsou považovány za výhodu oproti AFP při časném screeningu skupiny.s vysokým rizikem HCC.Kombinovaná detekce CTC na základě markerů však může zvýšit procento pozitivních výsledků.54 Směs protilátek anti-ASGPR a CPS1 dosáhla 91% míry detekce CTC u pacientů s HCC.63 Zhang a kol.použili CTC čipy s protilátkami proti ASGPR, P-CK a CPS1 a odlišili pacienty s HCC od benigních jaterních onemocnění a non-HCC se 100 %.64 Wangova studie identifikovala 60 % EpCAM+ CTC u 42 pacientů s HCC a zjistila významnou korelaci mezi incidencí a počtem CTC ve stadiu TNM. 65 Guo 等 人 发现 ， 在 AFP 水平 <20 ng/ml 的 125/171 (73%) 名 患者 中 ， CTC 的 PCR 评分 ， ， 敏感性 敏感性 敏感性 敏感性 ， ， ， 特异性 特异性 特异性 特异性 ， ， 而 而 而 而 而 而 而 而 而 而 而 ， ， ， ， ， ， ， ， ， ， 特异性 特异性 特异性 特异性 特异性 特异性 特异性 特异性 特异性 特异性 特异性 特异性 特异性 特异性 特异性 特异性 特异性 特异性 特异性 特异性 特异性 特异性 特异性 特异性 特异性 特异性 特异性 特异性 特异性 特异性 特异性 特异性 特异性 特异性 特异性 特异性 特异性 特异性 特异性值为20 ng/ml 时的特异性为57,0 % 和90,0 %。 65 Guo 等 人 发现 在 在 在 水平 <20 ng/ml 的 125/171 (73%) 名 患者 ， ， CTC 衍生 PCR 评分 ， 敏感性 为 为 72,5%， 为 95,0%截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 为 为 为 为 为 时 的 特异性 为 57,0% 和 90,0%。。。。 90,0%。65 Guo a kol.обнаружили, что у 125/171 (73%) пациентов с уровнем АФП <20 нг/мл показатели ПЦР, полученные с помощью ЦОК, были повышены с чувствительностью 72,5% и специфичностью 95,0%, в то время как АФП на уровне отсечки Специфичность составляла 20 нг/мл. zjistili, že u 125/171 (73 %) pacientů s hladinami AFP < 20 ng/ml byly hodnoty PCR odvozené od CTC zvýšené se senzitivitou 72,5 % a specificitou 95,0 %, zatímco AFP byla na hranici specifičnosti byla 20 ng/ml.ml bylo 57,0 % a 90,0 %.66 Kombinace ORP a CTC zlepšuje detekci HCC.45 CTC jsou považovány za lepší než AFP v časném screeningu vysoce rizikových HCC populací.U CTC-pozitivních a vysoce rizikových skupin HCC by tedy mělo být CTC testování rutinně kombinováno s ultrazvukem a detekcí AFP.CTC jsou však považovány za důležité prediktory nádorových metastáz a recidivy a detekce CTC se samostatně nedoporučuje jako diagnostický nástroj.62 CTC tedy může sloužit jako lepší prediktivní biomarker než jiné v současnosti používané markery. Zhou et al zjistili, že pacienti se zvýšeným počtem EpCAM+ CTC a regulačních T buněk vykazovali vyšší riziko rozvoje recidivy HCC než pacienti s nízkým počtem CTC, s poměrem recidivy 66,7 % vs. 10,3 % (P < 0,001).67 Podobnou studii uvedli Zhong et al.68 Navíc Qi zjistila, že 101 ze 112 pacientů (90,81 %) s HCC, včetně pacientů s raným stádiem onemocnění, bylo pozitivních na CTC a že velmi malé uzliny HCC byly detekovány po 3 do 5 měsíců sledování. Zhou et al zjistili, že pacienti se zvýšeným počtem EpCAM+ CTC a regulačních T buněk vykazovali vyšší riziko rozvoje recidivy HCC než pacienti s nízkým počtem CTC, s poměrem recidivy 66,7 % oproti 10,3 % (P < 0,001).67 A podobnou studii uvedli Zhong et al.68 Navíc Qi zjistila, že 101 ze 112 pacientů (90,81 %) s HCC, včetně pacientů s raným stádiem onemocnění, bylo pozitivních na CTC a že velmi malé uzliny HCC byly detekovány po 3 až 5 měsíců sledování. Чжоу a др.обнаружили, что у пациентов с повышенным количеством ЦОК EpCAM+ и регуляторных Т-клеток риск развития рецидива ГЦК был выше, чем у пациентов с низким количеством ЦОК, с коэффициентом рецидивов 66,7% против 10,3% (P <0,001)67. Zhou et al zjistili, že pacienti se zvýšenými EpCAM+ CTC a regulačními T buňkami měli vyšší riziko recidivy HCC než pacienti s nízkými CTC, s mírou recidivy 66,7 % oproti 10,3 % (P<0,001)67.Podobnou studii provedli Zhong et al.68. Kromě toho Qi zjistila, že 101 ze 112 pacientů (90,81 %) s HCC, včetně pacientů s časným onemocněním, mělo CTC a že velmi malé uzliny HCC byly detekovány po 3 až 5 měsících sledování. Zhou 等 人 发现 ， 与 CTC 数量 较 少 的 患者 ， ， EPCAM+ CTC 和 调节性 T 细胞 数量 的 患者 发生 HCC 复发 的 风险 更 高 ， 复发率 分别 为 66,7% 和 10,3% (P <0,001) 的 的 风险 更 ， 分别 分别 分别 分别 分别 分别 分别 分别 分别 分别 分别 分别 分别 分别 分别 分别 分别 分别 分别 分别 分别 分别 分别 分别 分别 分别 Zhou 等 人 发现 与 与 CTC 数量 少 的 患者 相比 ， EPCAM+ CTC 和 T 细胞 数量 的 发生 HCC 复发 风险 更 ， 复发率 分别 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为p < 0,001) .... ........ Чжоу a др.обнаружили, что пациенты с повышенным количеством ЦОК EpCAM+ и регуляторных Т-клеток имели более высокий риск рецидива ГЦК по сравнению с пациентами с меньшим количеством ЦОК, с частотой рецидивов 66,7% и 10,3% соответственно (P <0,001). Zhou a kol.zjistili, že pacienti se zvýšenými EpCAM+ CTC a regulačními T buňkami měli vyšší riziko recidivy HCC ve srovnání s pacienty s méně CTC, s mírou recidivy 66,7 %, respektive 10,3 % (P < 0,001).Podobnou studii uvedli Zhong et al.68 Kromě toho Qi zjistila, že 101 ze 112 pacientů s HCC (90,81 %), včetně pacientů s časným onemocněním, mělo pozitivní výsledky CTC a po 3 návštěvách zjistilo velmi malé uzliny HCC.Pozorování až 5 měsíců.Také našli CTC u 12 pacientů s chronickou infekcí HBV a našli malé nádory HCC během 5 měsíců u 2 CTC-pozitivních pacientů.69 CTC tedy mohou být použity k predikci HCC, 70 ale mohou být používány rutinněji jako prediktivní biomarkery.
Stejně jako cfDNA je i cfRNA uvolňována do krevního řečiště prostřednictvím různých systémů.Tyto molekuly v periferní krvi představují rakovinnou tkáň původu.Ve srovnání s markery detekovanými neinvazivními metodami jsou cfRNA dynamičtěji regulované, tkáňově specifické a hojné v extracelulárním prostředí.Význam a diagnostická hodnota 71 miRNA (miRNA) v HCC byla popsána v mnoha studiích.miRNA jsou endogenní nekódující RNA (ncRNA), které regulují různé molekulárně biologické aktivity inhibicí translace cílových messenger RNA (mRNA).miRNA se nacházejí v apoptotických tělech zapouzdřených v exozomech, ale mohou se také stabilně vázat na sérové ​​proteiny a lipidy v periferní krvi a lze je použít k hodnocení HCC.mikroRNA se podílejí na regeneraci jater, metabolismu lipidů, apoptóze, zánětu a vývoji HCC.72 Onkogenní miRNA jako miR-21, miR-155 a miR-221 jsou u HCC dobře známé.Zejména miR-21 hraje klíčovou roli v syntéze kolagenu v extracelulární matrix a fibróze a podporuje hepatokarcinogenezi aktivací hematopoetických kmenových buněk.72,73 Nádorové supresorové miRNA v HCC zahrnují miRNA-122, miRNA-29, rodinu Let-7 a rodinu miRNA-15.Rodina Let-7 se skládá z mnoha tumor supresorových miRNA, které se zaměřují na rodinu RAS.Rodina miR-15 zahrnuje miR-15a, miR-15b, miR-16, miR-195 a miR-497, které mají komplementární sekvence pro určité mRNA.Kromě toho jsou pro časný screening HCC důležité také dlouhé nekódující RNA (lncRNA) a kruhové RNA (cirRNA).lncRNA představují nejširší třídu ncRNA, včetně ncRNA podobných mRNA, a podílejí se na patogenezi mnoha lidských onemocnění.LncRNA hrají regulační roli v jaterním mikroprostředí a chronickém onemocnění jater.74 CircRNA jsou také třídou ncRNA s mnoha funkcemi při regulaci genové exprese.Nedávno byly circRNA považovány za diagnostické nástroje pro HCC.
Cirkulující volná RNA má pozoruhodnou stabilitu, včetně odolnosti vůči teplotě, pH a RNáze, díky čemuž je izolace fnRNA z periferní krve méně únavná pomocí standardních metod purifikace RNA.Mezi nejčastěji používané metody patří NGS, microarray a RT-qPCR.NGS umožňuje měření mikroRNA v celém genomu.Tato metoda je však nákladná a analýza není standardizovaná.Naproti tomu RT-qPCR je levná, rychle amplifikuje nukleové kyseliny a nabízí mnoho výhod, jako je vyšší citlivost, vyšší přesnost, širší dynamický rozsah a vyžaduje méně vzorků.Microarrays jsou další metodou používanou pro detekci miRNA založenou na citlivé a specifické hybridizaci cílových miRNA s komplementárními DNA sondami, 75 ale analýza dat microarray je časově náročná.
Cirkulující miR-122 a Let-7 byly hlášeny jako potenciálně užitečné při diagnostice časného stadia HCC u vysoce rizikových skupin, markerů u pacientů s premaligními uzly spojenými s HBV a HCC v časném stádiu.76 Cai a kol.zjistili, že členové rodiny Let-7 (miR-92, miR-122, miR-125b, miR-143, miR-192, miR-16, miR-126 a miR-199a/b) jsou vystaveni riziku chronické HCC u pacientů s hepatitidou.Rodina Let-7 může sloužit jako účinný náhradní biomarker pro predikci vývoje HCC u vysoce rizikových skupin spojených s chronickou hepatitidou C. 77 miR-122 má vysokou diagnostickou přesnost v detekci časného HCC u pacientů s jaterní cirhózou.78 Sérum cirkulující MiR-107 bylo také hodnoceno v časných stádiích HCC 79 a ukázalo se, že má dobrý potenciál u vysoce rizikových populací.Zhou et al uvedli, že panel miRNA (miR-122, miR-192, miR-21, miR-223, miR-26a, miR-27a a miR-801) může odlišit HCC od chronické hepatitidy B (CHB) a cirhózy senzitivita byla 79,1 % a 75 % a specificita 76,4 % a 91,1 %, v uvedeném pořadí.80 U HBV souvisejícího HCC jsme zjistili, že hladiny miR150 byly významně sníženy ve srovnání s hladinami u pacientů s chronickou HBV bez HCC (senzitivita 79,1 %, specificita 76,5 %).-224 byl zvýšen u HCC ve srovnání se zdravými kontrolami a analýzy podskupin ukázaly vyšší hladiny u pacientů s HCC spojeným s HBV.cirhóza spojená s hepatitidou B a pacienti s HCC identifikovali klasifikátor siRNA obsahující sedm odlišně exprimovaných siRNA, které mohou detekovat HCC v různých kontrolách;Rozsah AUC při časném screeningu je lepší než u dobrovolníků AFP.Zjistili, že čtyři miRNA (miR-1972, miR-193a-5p, miR-214-3p a miR-365a-3p) mohou odlišit pacienty s HCC od pacientů bez HCC.Pět nadměrně exprimujících miRNA (miR-122-5p, miR-125b-5p, miR-885-5p, miR-100-5p a miR-148a-3p) je považováno za potenciální HBV infekce u HCC, cirhózy a biomarkerů CHB, zejména miR-34a-5p mohou být biomarkery jaterní cirhózy85 a mohou být potenciálními biomarkery pro časný screening HCC u vysoce rizikových populací.Nejvíce studovaná lncRNA v HCC je vysoce aktivovaná u rakoviny jater (HULC).Jiné studie ukázaly, že HULC cirkulující u pacientů s HCC lze použít jako diagnostický marker, protože tato lncRNA je u pacientů s HCC vysoce upregulována ve srovnání se zdravými jedinci.71,86 Mezi ostatními lnRNA je LINC00152 považována za nejlepší diagnostickou lncRNA díky své vysoké AUC, citlivosti a specificitě.86 V jedné studii se exprese LINC00152 v periferní krvi postupně zvyšovala z normálních zdravých kontrol na pacienty s CHB a cirhózou a nakonec byla nejvyšší u HCC.Studie exprese circSMARCA5 v plazmě pacientů s HCC ukázaly progresivní pokles exprese HCC v rozsahu od hepatitidy po cirhózu a prekancerózní léze.Analýza ROC křivek potvrdila potenciál těchto circRNA při odlišení pacientů s hepatitidou nebo jaterní cirhózou od pacientů s HCC, zejména těch s hladinami AFP pod 200 ng/ml.Kromě toho Zhu analyzoval 13 617 cyklických RNA ve vzorcích plazmy od pacientů HCC asociovaných s HBV a potvrdil, že 6 cyklických RNA bylo exprimováno odlišně v HCC a cirhóze spojené s HBV, což naznačuje, že cRNA mohou být prospěšné.markery pro časný screening vysoce rizikových skupin, jako jsou skupiny spojené s onemocněním jater, pacienti se sklerózou.88
Exosomy jsou membránové vezikuly o průměru 40–160 nm;mnohočetné intracelulární vezikuly fúzují s buněčnou membránou a jsou uvolňovány do extracelulární matrice.Obsahují mnoho aktivních složek, včetně lipidů, proteinů, RNA a DNA, a hrají klíčovou roli v komunikaci mezi buňkami, HCC i non-HCC buňkami.89,90 Exosomy regulují progresi HCC aktivací hepatocytových fibroblastů a hvězdicových buněk, imunitních buněk, normálních hepatocytů a HCC buněk.91 V nádorovém mikroprostředí nádorové buňky produkují velké množství exozomů, které jsou přenášeny z rakovinných buněk do nezralých buněk, které se zase podílejí na onkogenezi, degradaci a buněčné signalizaci.92 Studie ukázaly, že exosomy mohou během patologických procesů přenášet onkogeny do normálních buněk, což může být jeden z mechanismů invaze a metastázování nádorů.93 Role exozomů v progresi rakoviny může být dynamická a specifická pro typ rakoviny, 89 Exozomy mohou být internalizovány sousedními nebo vzdálenými buňkami, aby regulovaly více cílových genů v buňkách příjemce, které se mohou podílet na intercelulární komunikaci iontů a interakcích buněčného mikroprostředí, mohou zprostředkovávají buněčnou signalizaci a metabolismus.94 Charakteristiky a dynamické změny exosomových cargo molekul přímo odrážejí charakteristiky a dynamické změny rodičovských nádorových buněk,95 což je také základem pro využití exozomů v diagnostice a prognóze nádorových onemocnění, jakož i pro predikci individuální odpovědi na protinádorovou terapii. ..96
Tradiční laboratorní metody pro izolaci a analýzu exozomů jsou složité, vícekrokové a časově náročné, včetně ultracentrifugace, filtrace, vylučovací chromatografie, imunoafinitní purifikace, Western blotting, enzymatické imunoanalýzy (ELISA), PCR a průtokové analýzy.miniaturizované systémy a platformy lab-on-a-chip využívající mikro/nanotechnologie jsou široce vyvíjeny pro rychlou a pohodlnou in situ izolaci exozomů.Analýza sledování nanočástic (NTA) je široce používaná metoda pro charakterizaci velikosti a koncentrace exozomů, včetně metod, jako jsou magnetické nanočástice a polyhydroxyalkanoáty.Mikrofluidní a elektrochemické metody mohou také rychle detekovat exosomy ve vysokých výtěžcích.
Exosomální proteiny jsou důležitými markery pro diagnostiku HCC.Ve studii Arbelaiz byla hladina 98 RasGAP SH3 vazebného proteinu (G3BP) a polymerního imunoglobulinového receptoru (PIGR) významně zvýšena v exozomech odvozených od HCC a předpokládaná kombinovaná účinnost těchto dvou proteinů byla lepší než u AFP.Přetížení železem je důležitým faktorem přispívajícím k rozvoji HCC.Tseng uvedl, že hepcidin může hrát klíčovou roli v rezistenci vůči HCC.99 Exozomy odvozené ze séra pacientů s HCC měly významně vyšší počet kopií variant mRNA hepcidinu než jejich zdravé protějšky, což naznačuje, že hepcidin může být novým diagnostickým biomarkerem pro HCC.Protein 14-3-3ζ v exozomech produkovaných 100 HCC může snižovat aktivaci, proliferaci a diferenciaci T buněk a může indukovat transformaci T buněk na regulační T buňky, což vede k depleci T buněk.101 To je podpořeno několika studiemi zkoumajícími únik nádoru z imunitního dohledu, 102 který může přispívat k tumorigenezi HCC.
Kromě přítomnosti ecRNA v plazmě nebo séru mohou být exozomy obohacené o RNA použity pro neinvazivní staging v reálném čase při časném screeningu nádorů a ke stanovení vývoje nádoru a odpovědi na terapii.Hladina exosomální miRNA-21 v krevním séru ve skupině HCC byla 2,21krát vyšší než ve skupině CHB a ve skupině HCC byla 5,57krát vyšší než u zdravé populace.Ve Wangově studii exozomy významně zvýšily HCC ve srovnání s pacienty s cirhózou s hodnotami AUC 0,83 (95% CI 0,74–0,93) a 0,94 (95% CI 0,88–1,00).104 Získaná data objasnila zapojení specifických exosomálních cargo molekul do regulace onkogeneze a progrese HCC.105 Exprese miR-221, miR-103, miR-181c, miR-181a, miR-93 a miR-26a v séru je konzistentní.a metastázy a hladiny miR21 byly mnohem vyšší u pacientů s HCC než u zdravých kontrol a také u pacientů s CHB.102 LncRNA měla potenciální diagnostickou hodnotu u HCC.Studie ukázaly, že exozomy odvozené ze séra pacientů s HCC mají významně vyšší hladiny LINC00161, LINC000635 a lncRNA aktivované transformujícím růstovým faktorem-β než u pacientů bez HCC, a tyto lncRNA jsou silně spojeny se stadiem TNM a objemem nádoru.110 Conigliaro a kol.Bylo zjištěno, že exozomy CD90+ exprimují vysoké hladiny lncRNAH19, což významně zvyšuje uvolňování vaskulárního endoteliálního růstového faktoru (VEGF) a produkci receptoru VEGF-R1, čímž stimuluje angiogenezi.93 CircRNA jsou dalším typem exosomálních ncRNA – exprimované na nižších, ale stabilních úrovních napříč druhy, circRNA také vykazují specificitu pro buněčný typ, typ tkáně, vývojové stadium a regulační aktivitu.111 circRNA jsou diagnostické biomarkery pro časnou a minimálně invazivní rakovinu.112 Nedávné klinické studie ukázaly, že specificita jednotlivých miRNA v predikci HCC není ideální.Proto komplexní detekce pomocí více testů (např. miR-122 a miR-48a v kombinaci s AFP) může zlepšit identifikaci časného HCC a odlišení HCC od cirhózy.100
Pacienti s CHB a jaterní cirhózou jsou nejčastější vysoce rizikovou skupinou pro rozvoj HCC.U vysoce rizikových skupin by po dosažení trvalé virologické odpovědi měla být vyvinuta nákladově efektivní strategie sledování založená na riziku HCC a včasný screening je klíčem ke zlepšení diagnostiky a léčby HCC s vysokým poměrem nákladů a efektivity2 ..Časné metody screeningu rakoviny mají mnoho omezení: účinné metody včasného screeningu nebyly vyvinuty pro většinu typů rakoviny a adherence je obvykle nízká.Ve srovnání s tradičními metodami časného screeningu má technologie tekuté biopsie zjevné výhody: snadnost odběru vzorků, panrac detekce, dobrá reprodukovatelnost vzorku a účinná odpověď na heterogenitu nádoru.Vzhledem k hospodárnosti metod spojených s tekutou biopsií nebylo jejich použití při screeningu HCC rutinně testováno.Navzdory pokrokům v přesné detekci na molekulární úrovni je tekutinová biopsie k detekci HCC u cílových pacientů nákladná, což omezuje její široké použití ve srovnání se specifickými zobrazovacími postupy, jako je ultrazvuk a magnetická rezonance.113,114 Předchozí studie však ukázala, že tekutá biopsie prokázala významný přínos, pokud jde o roky života upravené na kvalitu (QALYs).115 Byly také prokázány přínosy tekuté biopsie u časného karcinomu žaludku a nosohltanu.116,117 Současný názor je, že tekutá biopsie může doplňovat sérové ​​biomarkery a radiologický screening při detekci a diagnostice nádorů.117 118
Podle současné literatury prokázala technologie fluidní biopsie významně vyšší senzitivitu a specificitu při časném screeningu vysoce rizikových skupin na rakovinu jater.Bez ohledu na typ tekutinové biopsie dokáže odlišit HCC od vysoce rizikových jedinců bez HCC, což naznačuje důležitost včasného screeningu, protože rozdíly mezi vysoce rizikovými a zdravými jedinci jsou evidentní.ctDNA má krátký poločas a lze ji použít k detekci HCC, takže jakékoli změny v cDNA odvozené z nádoru mohou v reálném čase poskytnout konkrétní důkaz progrese nádoru, zejména u malých nádorů.Vysoká hladina ctDNA indikuje vývoj a šíření rakoviny a je časným indikátorem progrese a recidivy.Navíc na základě výsledků ctDNA mohou pacienti dostávat individualizovanou léčbu a sledování.119 Specifická metylační místa mohou být lepším markerem než AFP pro včasnou identifikaci HCC a cirhotických uzlů.U resekovatelných případů HCC svědčí vysoké hladiny cDNA pro mikrovaskulární invazi a pooperační recidivu a metastázy.Změny v počtu kopií jsou spojeny s přežitím pacientů s HCC.Lze předpokládat, že hodnocení cDNA se může podílet na celkové léčbě HCC a cDNA může sloužit jako účinný indikátor terapeutické modulace.Markery založené na specifických genetických mutacích v ctDNA byly přijaty klinickými směrnicemi k predikci účinnosti a sledování lékové rezistence.Testování ctDNA může být nejužitečnějším nástrojem tekuté biopsie pro časný screening.CTC také hrají klíčovou roli při včasném screeningu vysoce rizikových skupin HCC.Různé markery CTC asociovaných s HCC jsou zvláště důležité pro vznik, rozvoj a recidivu HCC.Jako membránové vezikuly se exozomy podílejí na mezibuněčné komunikaci, zejména v buňkách HCC.Cirkulující mikroRNA jsou v krvi stabilní, a proto mohou být užitečnější pro časný screening HCC.Postupně byly objeveny exosomální proteiny a exozomy bohaté na RNA a byla potvrzena jejich prediktivní účinnost pro HCC.Je zajímavé, že různé etiologie HCC mohou být také spojeny s různými mutacemi, takže můžeme vybrat různé biomarkery pro časný screening na základě různých etiologií HCC.120
Současné techniky tekutinové biopsie jsou však z hlediska stability sporné a nemohou nezávisle provádět časný screening nebo monitorování HCC, ale stále mohou doplňovat individuální screening a diagnostiku.121 Jako forma tekuté biopsie má detekce a zobrazování ctDNA, CTC, cfRNA a exozomově asociované AFP nebo PIVKA-II slibné uplatnění v časné diagnostice a prognóze HCC.Přesný mechanismus uvolňování ctDNA do krve však zbývá objasnit.Odhalení základních biologických vlastností ctDNA může usnadnit její použití jako markeru.Malé množství ctDNA v oběhu a přísné požadavky na manipulaci se vzorky jsou výzvou pro klinickou implementaci detekce cDNA u HCC.Genetické mutace navíc nemají specifické rysy, které umožňují přesnou identifikaci karcinogenů.Vzhledem k tomu, že v normálních tkáních je také přítomno více genetických a somatických variant, genetické mutace identifikované tekutinovou biopsií mohou mít omezené využití při časném screeningu HCC.122 Omezení dobře definovaných užitečných genových cílů a biomarkerů, které pomáhají odlišit cDNA od nenádorové DNA, jsou nejdůležitějšími problémy při použití cDNA.nedostatek užitečných citlivých a specifických markerů pro detekci CTC.Byly nalezeny pouze životaschopné buňky s metastatickým potenciálem a optimální kombinace markerů obohacených CSC nebyla jasná.Izolace CTC pro kultivaci a hodnocení jejich mutačních profilů je také náročný úkol.Kvůli problémům s identifikací, izolací a purifikací exozomů je konkrétní molekulární mechanismus stále nejasný a předchozí studie mechanismu exozomů a HCC nebyly do hloubky propracovány a způsob, jakým jsou miRNA, lncRNA a proteiny tříděny do exozomů a není jasné, zda příjem exosomu je proces specifického typu.Využití exosomů pro diagnostiku a léčbu HCC je stále v preklinické fázi.Nedostatek standardizace postupů tekuté biopsie, jako je typ zkumavek používaných k odběru krve, objem krve, uchovávání a detekce vzorků, izolace a obohacení, může znemožnit jejich použití v běžné klinické praxi kvůli rozdílům v praxi v různých lékařských střediscích.Účinnost tekuté biopsie při časném screeningu, diagnostice, hodnocení účinnosti a predikci HCC je třeba ještě prozkoumat, zejména u vysoce rizikových skupin.Technologie tekuté biopsie má velký potenciál a očekává se, že v blízké budoucnosti bude široce používána v klinické praxi rakoviny jater.
1. Sung H., Furley J., Siegel RL a kol.Global Cancer Statistics 2020: GLOBOCAN odhaduje výskyt a úmrtnost na 36 typů rakoviny ve 185 zemích.CA Cancer J Clin.2021;71(3):209-249.doi: 10.3322/caac.21660
2. Sídlo Národní zdravotní komise.Kritéria pro diagnostiku a léčbu primární rakoviny jater (vydání 2022) [J].Journal of Clinical Liver Diseases, 2022, 38(2): 288-303.doi: 10.3969/j.issn.1001-5256.2022.02.009
3. Zhou J, Sun H, Wang Z a kol.Pokyny pro diagnostiku a léčbu hepatocelulárního karcinomu (vydání z roku 2019).Rakovina jater.2020; 9(6):682-720.doi: 10.1159/000509424
4. Kokudo N, Takemura N, Hasegawa K, et al.Pokyny pro klinickou praxi pro hepatocelulární karcinom: Japonská společnost pro jaterní onemocnění, 2017 (JSH-HCC 4th guidelines), aktualizace z roku 2019.Zásobník pro onemocnění jater.2019;49(10):1109–1113.doi:10.1111/hepr.13411
5. Barrera-Saldana HA, Fernandez-Garza LE, Barrera-Barrera SA Tekutá biopsie u chronického onemocnění jater.Ann Hepato.2021;20:100197.doi:10.1016/j.aohep.2020.03.008
6. Tai TKYu., Tan P.Kh.Tekutá biopsie rakoviny prsu: cílený přehled.Arch Pathol Lab Med.2021;145(6):678–686.doi: 10.5858/arpa.2019-0559-RA
7. Kanval F., Singal AG Sledování hepatocelulárního karcinomu: současné osvědčené postupy a budoucí směry.Gastroenterologie.2019;157(1):54-64.doi:10.1053/j.gastro.2019.02.049
8. European Research Association L, European Organization R, C Therapeutics.Klinická doporučení EASL-EORTC: léčba hepatocelulárního karcinomu.J Heparin.2012;56(4):908–943.doi:10.1016/j.jhep.2011.12.001
9. Zhang G., Ha SA, Kim HK a kol.Kombinovaná analýza AFP a HCCR-1 jako užitečných sérologických markerů u malého hepatocelulárního karcinomu: prospektivní kohortová studie.Dis Mark.2012;32(4):265–271.doi: 10.3233/DMA-2011-0878
10. Chen S, Chen H, Gao S, a kol.Diferenciální exprese plazmatické mikroRNA-125b u onemocnění jater spojených s virem hepatitidy B a diagnostický potenciál hepatocelulárního karcinomu vyvolaného virem hepatitidy B.Rezervoár onemocnění jater.2017;47(4):312-320.doi:10.1111/hepr.12739
11. Halle PR, Foster F., Kudo M. a kol.Biologie a význam alfa-fetoproteinu u hepatocelulárního karcinomu.Játra int.2019;39(12):2214–2229.doi: 10.1111/liv.14223
12. Omata M, Cheng AL, Kokudo N, et al.Klinické pokyny pro léčbu hepatocelulárního karcinomu v asijsko-pacifické oblasti: aktualizace z roku 2017.Mezinárodní organizace pro onemocnění jater.2017;11(4):317–370.doi: 10.1007/s12072-017-9799-9
13. Xu Fei, Zhang Li, He Wei a kol.Diagnostická hodnota sérové ​​PIVKA-II samostatně nebo v kombinaci s AFP u čínských pacientů s hepatocelulárním karcinomem.Dis Mark.2021;2021:8868370.doi: 10.1155/2021/8868370
14. Durin L., Praradines A., Basset S. et al.Nemalobuněčný karcinom plic neplazmatická humorální tekutinová biopsie: blíže k nádoru!buňka.2020; 9(11).doi: 10,3390/buňky9112486
15. Mader S, Pantel K. Tekutá biopsie: současný stav a vyhlídky do budoucna.Léčba Oncol Res.2017;40(7-8):404-408.doi: 10.1159/000478018
16. Palmirotta R, Lovero D, Cafforio P a kol.Tekutá biopsie rakoviny: multimodální diagnostický nástroj v klinické onkologii.Adv Med Oncol.2018;10:1758835918794630.doi: 10.1177/1758835918794630
17. Mandel P., Metais P. Nukleové kyseliny v lidské plazmě.CR Seances Soc Biol Fil.1948;142(3-4):241-243.
18. Mouliere F, Chandrananda D, Piskorz AM, et al.Pokročilá detekce cirkulující nádorové DNA analýzou velikosti fragmentů.Věda překládá medicínu.2018;10:466.doi:10.1126/scitranslmed.aat4921
19. Underhill HR, Kitzman JO, Hellwig C. a kol.Délka fragmentu DNA cirkulujícího nádoru.geny PLOS.2016;12(7):e1006162.doi:10.1371/journal.pgen.1006162
20. Cheng F, Su L, Qian C. Cirkulující nádorová DNA: slibný biomarker v tekuté biopsii rakoviny.cílový nádor.2016;7(30):48832–48841.doi:10.18632/oncotarget.9453
21. Bettegovda S., Sauzen M., Leary RJ a kol.Detekce cirkulující nádorové DNA v časných a pozdních stádiích lidských malignit.Věda překládá medicínu.2014;6(224):224ra24.doi:10.1126/scitranslmed.3007094
22. Mehes G. Tekutá biopsie pro mutační prediktivní analýzu solidní rakoviny: pohled patologa.J Biotechnologie.2019;297:66-70.doi: 10.1016/j.jbiotec.2019.04.002
[PubMed] 23. Lenarts L, Tuveri S, Yatsenko T, et al.Včasná detekce nádoru screeningem cirkulující plazmové DNA: humbuk nebo naděje?Belgické klinické právo.2020;75(1):9-1 doi:10.1080/17843286.2019.1671653
24. Nishida N. Vliv viru hepatitidy a stárnutí na metylaci DNA v lidské hepatokarcinogenezi.Histopatologie.2010;25(5):647–654.doi: 10,14670/HH-25,647